關于動物細胞擴大培養的科研文獻分析  液氮罐

　　1.該實驗研究的目的或意義

　　利用動物細胞培養可以生產具有重要醫用價值的酶、生長因子、疫苗和單抗等，已成為醫藥生物高技術產業的重要部分，利用動物細胞培養技術生產的生物制品已占世界生物高技術產品市場份額的50%，為了培養規模的進一步擴大、優化細胞培養環境、提高產品的產出率與保證其質量，動物細胞大規模培養技術已成為各生產企業發展至關重要的環節。

　　2.為達到該目的采用的什么方法

　　根據動物細胞的類型和培養特性，大規模培養可采用貼壁培養、懸浮培養和固定化培養等三種培養方法進行培養。

　　3.陳述該研究的結果

　　①貼壁培養：優點：(1) 細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗后直接加入新培養液，容易更換培養液;

　　(2) 因細胞固定載體表面，不需過濾系統，容易采用灌注方式培養，從而達到提高細胞密度的目的;

　　(3) 當細胞貼壁于生長基質時，細胞將更有效的表達一種產品;

　　(4) 同一設備可培養多種細胞，并根據需要采用不同的培養液和細胞的比例。

　　缺點：(1) 細胞繁殖貼壁后不易消化下來，培養的擴大比較困難;

　　(2) 培養設施占地面積大，設備投資大;液氮罐

　　(3) 采用細胞反應器培養，細胞無法進行顯微鏡觀察，不能有效監測細胞的生長狀態;

　　(4) 在測定和控制細胞所處環境的完全均勻化方面比較困難。

　　②懸浮培養：優點：(1) 操作簡單、培養條件均一、便于進行定量研究;

　　(2) 傳質和傳氧比較好，有利于細胞與培基中的營養物質和氣體充分接觸，而且易于控制培養條件(溫度、pH、氧分壓和CO2等);

　　(3) 它們在離體培養時不需要附著物，只需懸浮于培養液中就可以良好生長;

　　(4) 懸浮培養法細胞增殖快，產量高，設備結構簡單;

　　(5) 細胞傳代時不需要再分散，只需按比例稀釋即可繼續培養。可借鑒細菌發酵的經驗，容易擴大培養規模，可連續擴大生產量;

　　(6) 易于在連續密閉的系統中進行，減少了操作步驟和污染的機會。

　　③固定化培養：吸附法、包埋法、共價貼附法、微囊法、離子/共價交聯法

　　4.該實驗的創新點及不足

　　該實驗的方法創新點在于方法較為全面，優缺點分明，不足之處在于方法比較通用，沒有什么特別亮點的培養方法。

　　5.你在改實驗基礎上繼續研究的設計思路

　　既然大規模培養了細胞，如何能保存細胞也是一個問題，所以我想從保存細胞方面繼續設計研究。大概的試驗方法如下：

　　①.挑選細胞：選擇生長旺盛期, 細胞界限清楚, 立體感強, 形態良好的細胞。

　　②.消化細胞： 按細胞的常規消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.營養液(不含

　　血清), 以1000r/min,離心20分鐘，棄上清。

　　③.凍存懸液的制備： 將離心后沉淀的細胞收集起來, 加入適量凍存液, 輕輕吹打數次, 制成細胞懸液。

　　④.分裝封口： 將上述懸液分裝于安瓶內, 每支安靚裝1 毫升, 火焰封口, 貼好標記, 裝入紗布袋中。

　　⑤.梯度降溫： 將嚴密封口加注標記的細胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小時, 然后放入氣態冷凍30分鐘，使其降至-70℃以下，再直接浸入液氮中凍存。

　　⑥.復蘇培養：復蘇細胞時, 從液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并適當搖勻, 使其在1分鐘內融化完全。在無菌條件下打開安瓶,將細胞懸液移入培養瓶中,1ml細胞懸液加20ml培養液, 然后放入37℃ 培養箱中培養, 次日更培養1次。

　　⑦.觀察結果：觀察復蘇培養的細胞的生民貼壁狀態、細胞生長繁殖速度和細胞傳代能力。如果細胞貼壁良好, 仍能繼續傳代下去, 其生長速度與凍前比較無明顯差異, 則可認為凍存結果比較滿意。液氮罐