關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)的科研文獻(xiàn)分析  液氮罐

　　1.該實(shí)驗(yàn)研究的目的或意義

　　利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)可以生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價(jià)值的酶、生長因子、疫苗和單抗等，已成為醫(yī)藥生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分，利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的生物制品已占世界生物高技術(shù)產(chǎn)品市場(chǎng)份額的50%，為了培養(yǎng)規(guī)模的進(jìn)一步擴(kuò)大、優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境、提高產(chǎn)品的產(chǎn)出率與保證其質(zhì)量，動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已成為各生產(chǎn)企業(yè)發(fā)展至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。

　　2.為達(dá)到該目的采用的什么方法

　　根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞的類型和培養(yǎng)特性，大規(guī)模培養(yǎng)可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。

　　3.陳述該研究的結(jié)果

　　①貼壁培養(yǎng)：優(yōu)點(diǎn)：(1) 細(xì)胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養(yǎng)液，清洗后直接加入新培養(yǎng)液，容易更換培養(yǎng)液;

　　(2) 因細(xì)胞固定載體表面，不需過濾系統(tǒng)，容易采用灌注方式培養(yǎng)，從而達(dá)到提高細(xì)胞密度的目的;

　　(3) 當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長基質(zhì)時(shí)，細(xì)胞將更有效的表達(dá)一種產(chǎn)品;

　　(4) 同一設(shè)備可培養(yǎng)多種細(xì)胞，并根據(jù)需要采用不同的培養(yǎng)液和細(xì)胞的比例。

　　缺點(diǎn)：(1) 細(xì)胞繁殖貼壁后不易消化下來，培養(yǎng)的擴(kuò)大比較困難;

　　(2) 培養(yǎng)設(shè)施占地面積大，設(shè)備投資大;液氮罐

　　(3) 采用細(xì)胞反應(yīng)器培養(yǎng)，細(xì)胞無法進(jìn)行顯微鏡觀察，不能有效監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長狀態(tài);

　　(4) 在測(cè)定和控制細(xì)胞所處環(huán)境的完全均勻化方面比較困難。

　　②懸浮培養(yǎng)：優(yōu)點(diǎn)：(1) 操作簡單、培養(yǎng)條件均一、便于進(jìn)行定量研究;

　　(2) 傳質(zhì)和傳氧比較好，有利于細(xì)胞與培基中的營養(yǎng)物質(zhì)和氣體充分接觸，而且易于控制培養(yǎng)條件(溫度、pH、氧分壓和CO2等);

　　(3) 它們?cè)陔x體培養(yǎng)時(shí)不需要附著物，只需懸浮于培養(yǎng)液中就可以良好生長;

　　(4) 懸浮培養(yǎng)法細(xì)胞增殖快，產(chǎn)量高，設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單;

　　(5) 細(xì)胞傳代時(shí)不需要再分散，只需按比例稀釋即可繼續(xù)培養(yǎng)。可借鑒細(xì)菌發(fā)酵的經(jīng)驗(yàn)，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模，可連續(xù)擴(kuò)大生產(chǎn)量;

　　(6) 易于在連續(xù)密閉的系統(tǒng)中進(jìn)行，減少了操作步驟和污染的機(jī)會(huì)。

　　③固定化培養(yǎng)：吸附法、包埋法、共價(jià)貼附法、微囊法、離子/共價(jià)交聯(lián)法

　　4.該實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新點(diǎn)及不足

　　該實(shí)驗(yàn)的方法創(chuàng)新點(diǎn)在于方法較為全面，優(yōu)缺點(diǎn)分明，不足之處在于方法比較通用，沒有什么特別亮點(diǎn)的培養(yǎng)方法。

　　5.你在改實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上繼續(xù)研究的設(shè)計(jì)思路

　　既然大規(guī)模培養(yǎng)了細(xì)胞，如何能保存細(xì)胞也是一個(gè)問題，所以我想從保存細(xì)胞方面繼續(xù)設(shè)計(jì)研究。大概的試驗(yàn)方法如下：

　　①.挑選細(xì)胞：選擇生長旺盛期, 細(xì)胞界限清楚, 立體感強(qiáng), 形態(tài)良好的細(xì)胞。

　　②.消化細(xì)胞： 按細(xì)胞的常規(guī)消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.營養(yǎng)液(不含

　　血清), 以1000r/min,離心20分鐘，棄上清。

　　③.凍存懸液的制備： 將離心后沉淀的細(xì)胞收集起來, 加入適量凍存液, 輕輕吹打數(shù)次, 制成細(xì)胞懸液。

　　④.分裝封口： 將上述懸液分裝于安瓶內(nèi), 每支安靚裝1 毫升, 火焰封口, 貼好標(biāo)記, 裝入紗布袋中。

　　⑤.梯度降溫： 將嚴(yán)密封口加注標(biāo)記的細(xì)胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小時(shí), 然后放入氣態(tài)冷凍30分鐘，使其降至-70℃以下，再直接浸入液氮中凍存。

　　⑥.復(fù)蘇培養(yǎng)：復(fù)蘇細(xì)胞時(shí), 從液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并適當(dāng)搖勻, 使其在1分鐘內(nèi)融化完全。在無菌條件下打開安瓶,將細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)瓶中,1ml細(xì)胞懸液加20ml培養(yǎng)液, 然后放入37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 次日更培養(yǎng)1次。

　　⑦.觀察結(jié)果：觀察復(fù)蘇培養(yǎng)的細(xì)胞的生民貼壁狀態(tài)、細(xì)胞生長繁殖速度和細(xì)胞傳代能力。如果細(xì)胞貼壁良好, 仍能繼續(xù)傳代下去, 其生長速度與凍前比較無明顯差異, 則可認(rèn)為凍存結(jié)果比較滿意。液氮罐